NY∕T 3642-2020 桃品种鉴定 SSR分子标记法(农业)
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ID： |
0C26A7092FF2411D82CA530E6F2C4F51 |
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文件大小(MB)： |
1.03 |
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页数： |
19 |
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文件格式： |
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日期： |
2021-12-23 |
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ICS 65.020.01,B 05 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY /T 3642-2020,桃品种鉴定SSR分子标记法,Identification of peach cultivars using SSR markers method,2020 - 07 -27 发布2020 - 1 ↑ -01 实施,中华人民共和国农业农衬部发布,NY /T 3642-2020,目次,T而言 ………………… ………………………. n,1 1[1. 陀1 . ..,2 规范性可1m文件…,3 术语和l定义…,4 主要仪器设备及试剂…,5 溶液配制… … ….. ..,6 引物相关信息及使用,7 参!!自品种及其使用…,8 操作程序…….. .. . ..,9 结果统~'I,10 判定方法. .,附录八(规范性附录) 主要仪器设备及试剂…,附录B (规范性附录) 溶液配制,附录C(规范性附录) 核心引物名单及j芋3iIJ …,附录O ( 资料性附录) 核心引物相关信息………… … … .. .. . .…….. 10,附录E( 资料性附录) 参照品种名单及来源-…………… …… 14,I,NY / '1' 3642-2020,11,本标准由全国植物新品种测试标准化技术委员会(SAC/TC 277) 归口.,本标准起草单位中国农业科学院郑州果树研究所.,本标准主要起草人王力荣，1Jlr坷、朱更瑞、方伟超、自在同文、王新卫、关利平,NY /1' 3642- 2020,桃品种鉴定SSR 分子标记法,范围,本标准规定了利用简单蓝sl.序列(Si mplc scqucncc repcats ， SSRl 分子标记进行桃111:1~1 ~ll 鉴定的操作程,序、数据采集和判定方法,本标准适用于桃( Pru川s persica W描画画画温疆赢蕾慧副啤!L SSR 指纹数据自J 采i.í!及品利t鉴定.,2 规范性引用文件,下页,凡是不注日,NY/T 2341,NY/T 2594,3,NY/T,3. 1,核心引,期的版本适用于木文件.,扩蛤i 片段,时，校正噎稳脚飞主母雪场抖宽泛厅,4,见附录A .,5 溶液配制,见附录B,6 冒 物相关信息及使用,引物名单及序列见附录C ，号,7 参照晶种及其使用,参!!!!品种的名称及其相关信息参见附录E . 在进行符iJJ!IJ 样品的等位变异检iJJ!tl 时， 应同时包括相应参,(!品种的PCR 扩峭产物的检测,注1 . 同一名称不同来说的参照品种的某一位点上的等位变异可能不相同，在使用其他来源的参照rfl，;f!'ut ， Jii与以参}!!i,品种核对，确认无误后使川.,注2 对于附录D 中未包街的等位变异， JiY.按本标刊'c.h 法， 通过1lI!Hl DNA 分析仪与参照品利'同时进行检测确定其大小.,8 操作程序,8. 1 样品制备,每份样品中至少随机抽取3 个单株，混合后用于鉴定分析。当一致性结果较差时，进行单独取样分析,NY / 1' 3642-2020,8. 2 DN A 提取,a) 称11k桃新鲜i;JJ嫩JI.I一片1. 0 g ， m元菌双蒸水?f洗干净，装人2 mL 11l' O. 5 mm 直径钢殊的离心包',中，放入液氮"1"预冷，将预冷后的离心'm'放入高通盐组织研磨仪中进行冷冻liJf靡， 45 I-I z 研磨90,5 ， 至粉末状后， 依次加入400 μL 在65'C 71<.浴中预热的2 % CTA?裂lfìl 缓冲液、40μ L ?流基乙,酶，充分挤匀;,b) 离心管置于65 'C 恒汩l 71<.浴中保1日l 45 m i n ， WJ 间每隔1 0 m i n 轻轻转动离心管， 且&. 11 : 离心笆， 4 'C,12 000 g )al心5 min;,C) 11k上清液至新的无菌2 m L 离心营， 1m入等体积的苯盼-氯仿异戊醉(2 5 ' 24 ' 1, V ' V ' V). 颠,倒混匀2 min--3 min! 静1，' 10 min, 4'C 12000 g 离心1 0 mil1 j,d) 再次取上消液，转入新离心管中， 力u入等体积的豆豆仿-异戊醉(24 ' 1, V ' V ) ， 颠倒混匀2 min-3,mln ，前>'ì'l: 10 min ,4'C 12000 g J萄心1 0 mi l1 j,c) 轻轻地l吸收上消液，转入新离心管中，直u入1 / 10 体积的3 mol/L m!\胶制溶液， 2 . 5 倍体积20'C,T到冷元水乙醉，将离心~~佼佼上下摇动30 5, -20'CYfJ'1，~ 30 min 至能见到U DNA 絮状物;,f) 4'C 12000 g 离心2 mi n ，立Ufl倒掉上消液， 加入800μ L 75% 乙邸， 用手指轻弹笆'尖，使DNA 沉,淀漂浮于液体中， rfft J?5 min j,g) 4'C 12 000 g 1萄心2 min ， 弃上清液，再IJfI人800μL 75 % 的乙醉， 重复活洗DNA 2 次,h) 将离心管置于超净工作台干;垛，风干约5 minj,1m入250 μL o. 5X TE 缓冲液， 4'C 浴解DNA 10 m in ; }JU入l μL 10 mg/ mL á'J RNa5c A ， 涡旋混,匀，置于3 7'C 温滔30 min , ìì~lfi'f RNA;,j) 再加l人等体积的级仿-异戊醉(24 ' 1, V ' V) ， 轻轻混匀， 4'C 12000 g 离心1 0 mi n ;,……
……